Cómo superar las limitaciones de la cromatografía flash con un ELSD

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Cómo superar las limitaciones de la cromatografía flash con un ELSD

Casi todos los métodos e instrumentos enfrentan limitaciones. Es por eso que no puedo evitar emocionarme cuando una tecnología evoluciona lo suficiente como para superar algunos de estos límites. Un gran ejemplo es el ELSD.

Los sistemas de cromatografía flash equipados con ELSD permiten el análisis de muestras "difíciles", como carbohidratos, lípidos, ginkgólidos, aceites esenciales y productos naturales, que no se pueden purificar o recolectar solo con la detección UV tradicional.
La detección de α y β-santalol presente en el sándalo ilustra perfectamente este punto (ver imagen abajo). Mientras que la UV no detecta la presencia del compuesto, el detector ELS otorga al químico picos fácilmente distinguibles.
 

 

Pero, ¿cómo puede un ELSD detectar más tipos de compuestos en una ejecución cromatográfica en comparación con un detector UV solo?
 
Las funciones del detector se basan en un principio simple de tres pasos:
  • Paso 1: Nebulización: El eluyente de la columna se mezcla con un flujo de gas para formar una dispersión de gotas y, por lo tanto, se nebuliza.
  • Paso 2: evaporación de la fase móvil: La fase móvil se evapora.
  • Paso 3: Detección: Las partículas de analito secas pasan a través de un haz de luz en una celda de flujo. Las partículas dispersan la luz que es recogida por un fotodiodo. La cantidad de dispersión de luz está relacionada con la masa de los compuestos de interés.
 
Es posible que sepa que, tradicionalmente, la mayoría de los equipos de cromatografía flash utilizan únicamente un detector UV. Por lo tanto, vale la pena tomarse el tiempo para señalar algunas diferencias importantes entre ELSD y la detección UV.
 
El ELSD detecta cualquier compuesto no volátil, independientemente de su naturaleza, mientras que un detector UV solo registra compuestos que absorben la luz UV.
Los compuestos detectados por un ELSD generan una respuesta casi equivalente para cantidades similares. Las respuestas UV dependen en gran medida de los coeficientes de extinción. En la mayoría de los casos, estos coeficientes no reflejan la relación de masa real de los compuestos en la muestra.
 
A medida que los solventes se evaporan en un detector ELSD, hay poco o ningún cambio de línea base de gradiente. Además, se pueden utilizar disolventes que no sean compatibles con la detección UV debido a sus valores límite UV.
 
Estas diferencias entre ELSD y los detectores tradicionales como los UV pueden aportar grandes ventajas a su aplicación:
  • Debido a que el ELSD detecta moléculas no cromóforas, este detector puede ayudarlo a ver más impurezas que cuando usa un detector UV solo.ELSD proporciona una indicación más precisa de cantidades relativas en comparación con UV.
  • Los sistemas de cromatografía equipados con ELSD le permiten elegir solventes absorbentes de UV que pueden proporcionar polaridades y separaciones específicas .
  • El ELSD simplifica la recolección de fracciones, ya que no es necesario recolectar todo y se deben manejar menos fracciones durante el procesamiento posterior.
  • Los instrumentos de cromatografía con ELSD permiten una recuperación máxima al minimizar la pérdida de muestras.
 

Para todos los entusiastas de los carbohidratos, eche un vistazo al siguiente ejemplo de cómo puede usar un ELSD para detectar acarbosa, un carbohidrato que se usa en el tratamiento de pacientes diabéticos. Este compuesto se puede separar muy bien de los otros compuestos de azúcar presentes en la muestra. Sin ELSD, la detección de acarbosa sería difícil o imposible.



Por lo tanto, ELSD puede ser increíblemente beneficioso para aplicaciones estándar, incluso en presencia de compuestos UV visibles. Esto se debe a que la respuesta ELSD puede brindar una mejor indicación de la composición cuantitativa de su muestra. ELSD sigue siendo especialmente útil para muestras "difíciles" en las que están presentes compuestos no cromóforos y en las que la radiación ultravioleta proporciona una respuesta escasa o nula. El detector ELSD revelará todas las moléculas no volátiles que están presentes en la muestra.

Denoulet Bart
Texto extraído del Blog de Bart de BUCHI. Para mas información acceda al Blog original haciendo clic aquí 
 

 

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Casi todos los métodos e instrumentos enfrentan limitaciones. Es por eso que no puedo evitar emocionarme cuando una tecnología evoluciona lo suficiente como para superar algunos de estos límites. Un gran ejemplo es el ELSD.

Los sistemas de cromatografía flash equipados con ELSD permiten el análisis de muestras "difíciles", como carbohidratos, lípidos, ginkgólidos, aceites esenciales y productos naturales, que no se pueden purificar o recolectar solo con la detección UV tradicional.
La detección de α y β-santalol presente en el sándalo ilustra perfectamente este punto (ver imagen abajo). Mientras que la UV no detecta la presencia del compuesto, el detector ELS otorga al químico picos fácilmente distinguibles.
 

 

Pero, ¿cómo puede un ELSD detectar más tipos de compuestos en una ejecución cromatográfica en comparación con un detector UV solo?
 
Las funciones del detector se basan en un principio simple de tres pasos:
  • Paso 1: Nebulización: El eluyente de la columna se mezcla con un flujo de gas para formar una dispersión de gotas y, por lo tanto, se nebuliza.
  • Paso 2: evaporación de la fase móvil: La fase móvil se evapora.
  • Paso 3: Detección: Las partículas de analito secas pasan a través de un haz de luz en una celda de flujo. Las partículas dispersan la luz que es recogida por un fotodiodo. La cantidad de dispersión de luz está relacionada con la masa de los compuestos de interés.
 
Es posible que sepa que, tradicionalmente, la mayoría de los equipos de cromatografía flash utilizan únicamente un detector UV. Por lo tanto, vale la pena tomarse el tiempo para señalar algunas diferencias importantes entre ELSD y la detección UV.
 
El ELSD detecta cualquier compuesto no volátil, independientemente de su naturaleza, mientras que un detector UV solo registra compuestos que absorben la luz UV.
Los compuestos detectados por un ELSD generan una respuesta casi equivalente para cantidades similares. Las respuestas UV dependen en gran medida de los coeficientes de extinción. En la mayoría de los casos, estos coeficientes no reflejan la relación de masa real de los compuestos en la muestra.
 
A medida que los solventes se evaporan en un detector ELSD, hay poco o ningún cambio de línea base de gradiente. Además, se pueden utilizar disolventes que no sean compatibles con la detección UV debido a sus valores límite UV.
 
Estas diferencias entre ELSD y los detectores tradicionales como los UV pueden aportar grandes ventajas a su aplicación:
  • Debido a que el ELSD detecta moléculas no cromóforas, este detector puede ayudarlo a ver más impurezas que cuando usa un detector UV solo.ELSD proporciona una indicación más precisa de cantidades relativas en comparación con UV.
  • Los sistemas de cromatografía equipados con ELSD le permiten elegir solventes absorbentes de UV que pueden proporcionar polaridades y separaciones específicas .
  • El ELSD simplifica la recolección de fracciones, ya que no es necesario recolectar todo y se deben manejar menos fracciones durante el procesamiento posterior.
  • Los instrumentos de cromatografía con ELSD permiten una recuperación máxima al minimizar la pérdida de muestras.
 

Para todos los entusiastas de los carbohidratos, eche un vistazo al siguiente ejemplo de cómo puede usar un ELSD para detectar acarbosa, un carbohidrato que se usa en el tratamiento de pacientes diabéticos. Este compuesto se puede separar muy bien de los otros compuestos de azúcar presentes en la muestra. Sin ELSD, la detección de acarbosa sería difícil o imposible.



Por lo tanto, ELSD puede ser increíblemente beneficioso para aplicaciones estándar, incluso en presencia de compuestos UV visibles. Esto se debe a que la respuesta ELSD puede brindar una mejor indicación de la composición cuantitativa de su muestra. ELSD sigue siendo especialmente útil para muestras "difíciles" en las que están presentes compuestos no cromóforos y en las que la radiación ultravioleta proporciona una respuesta escasa o nula. El detector ELSD revelará todas las moléculas no volátiles que están presentes en la muestra.

Denoulet Bart
Texto extraído del Blog de Bart de BUCHI. Para mas información acceda al Blog original haciendo clic aquí 
 

 

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