Cromatografía flash vs HPLC preparativa: ¿Necesita velocidad o precisión?
Bart explora las diferencias, los beneficios y las limitaciones de la cromatografía flash frente a la HPLC preparativa
En esta publicación desglosaremos la cromatografía de adsorción y la cromatografía flash frente a la HPLCpreparativa para usted. ¡Siga leyendo para ver lo que nos hemos estado perdiendo hasta ahora!
¿Cuál es la gran diferencia entre la cromatografía flash y la HPLC preparatoria?
Primero empecemos por las similitudes. Ambos son tipos de cromatografía de adsorción . En la cromatografía de adsorción, la separación se rige por las interacciones de los componentes de la muestra con la fase estacionaria y móvil. Los compuestos con diferentes propiedades químicas, en particular polaridades, muestran diversas afinidades hacia la fase estacionaria y móvil. La afinidad, a su vez, está influenciada por dos propiedades moleculares, la adsorción y la desorción.
La adsorción describe la capacidad de un compuesto para adherirse a la fase estacionaria. La desorción, o solubilidad, describe qué tan bien se disuelve un componente de la mezcla en la fase móvil o solvente.
La velocidad con la que los componentes individuales de la muestra migran a través de la fase estacionaria depende de las propiedades de adsorción/desorción.
La cromatografía de adsorción se puede dividir en cromatografía preparativa o analítica.
◾Cromatografía analítica: Generalmente se realiza con cantidades más pequeñas de material para establecer la presencia o cuantificar las proporciones relativas de los componentes en una mezcla.
◾Cromatografía preparativa: Utilizada con frecuencia para separar o purificar los componentes de una mezcla para aplicaciones posteriores.
La cromatografía preparativa se divide además en cromatografía alimentada por gravedad (baja presión), cromatografía ultrarrápida (media presión) o HPLC preparativa (alta presión). Estos tipos de cromatografía, incluida la cromatografía ultrarrápida frente a la HPLC preparatoria, se diferencian principalmente por la presión generada por el flujo de la fase móvil a través de la fase estacionaria.
Examinemos los beneficios y las limitaciones de la columna abierta frente a la cromatografía flash y la HPLC preparartiva:
| Cromatografía en columna abierta | HPLC flash/prep |
|---|---|
| ventajas | ventajas |
| Bajos gastos de instrumentos, mantenimiento y consumibles Baja presión |
Proceso rápido: - Alta resolución - Altos caudales - Alta automatización Bajo consumo de solvente - Alta resolución Alta flexibilidad - Compatibilidad con una gran variedad de consumibles y detectores Alta reproducibilidad - Condiciones estables No se necesita campana extractora (si el colector de fracciones está cerrado) |
| Contras | Contras |
| Requiere mucho tiempo - Baja resolución - Bajos caudales Alto consumo de disolvente - Baja resolución Baja flexibilidad - No compatible con consumibles o detectores de alto rendimiento Baja reproducibilidad - No se necesita flujo ni presión regulados Campana de humos |
Instrumento y costo de mantenimiento Costo de con |
Ahora pasemos a lo fundamental de esta publicación: la cromatografía flash vs HPLC preparativa.
◾La cromatografía ultrarrápida se usa a menudo como un paso previo a la purificación para purificar grandes cantidades de muestras con una buena resolución.
◾La HPLC preparatoria se utiliza para lograr la máxima resolución, o pureza, en condiciones de menor capacidad de carga.
Las dos técnicas difieren en el material utilizado para la frase de la estación (tamaño de partícula diferente), la dimensión del cartucho o columna (diámetro interno y longitud), así como el caudal de la fase móvil. Hemos resumido los parámetros de la cromatografía flash frente a la HPLC preparatoria en la siguiente tabla:
| Flash | Prep HPLC | |
|---|---|---|
| Particle size | 15 - 63 uM | 5 - 15 uM |
| Column ID | 12 - 115 mm | 10 - 70 mm |
| Flow rate | 15 - 250 mL/min | 5 - 100 mL/min |
| Loading capacity | < 300 g | < 10 g |
| Max pressure | 50 bar | 300 bar |
Al igual que con cualquier cosa en la vida, con estas dos técnicas tienes una compensación. La cromatografía flash le ofrece una forma más rápida de procesar más muestras a la vez, la HPLC Prep es más lenta, pero le brinda una mejor resolución. Pero también hay algunas buenas noticias en esto. Hay sistemas de cromatografía que le permiten realizar cromatografía flash y HPLC de preparación en ellos, por lo que puede usar ambos métodos dependiendo de sus aplicaciones cambiantes.
Esperamos haber aumentado su conocimiento sobre la cromatografía flash frente a la HPLC preparativa y haber logrado brindarle mucha información precisa. Si está buscando información adicional sobre los tipos de cromatografía, sus beneficios y limitaciones, consulte nuestra Guía Chromapedia gratuita y muy completa. ¡Siempre hay más por descubrir!
Denoulet Bart
Texto extraído del Blog de Bart de BUCHI. Para mas información acceda al Blog original haciendo clic aquí
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